Reagens för peptidkondensation

För närvarande, i syntesen av peptider, används karboxylaktiveringsmetoder huvudsakligen för att fullborda peptidreaktioner. De tidigaste metoderna som användes var att aktivera aminosyror till syraklorider, azider, symmetriska anhydrider och blandade syraanhydrider. Men på grund av förekomsten av aminosyraracemisering under dessa förhållanden, faran med reaktionsreagens och komplexiteten i beredningen, ersattes de gradvis av senare kondensationsreagens, som kan delas in i två typer enligt deras struktur.: De huvudsakliga kondensationsreagensen är: Karbodiimidtyp, oniumsalttyp (Uronium).

Inkluderar huvudsakligen: DCC, DIC, EDC.HCl vänta. använd DCC utför reaktionen, på grund av DCU, finns DMF Den har mycket liten löslighet och producerar vit fällning, så den används i allmänhet inte i fastfassyntes. Men eftersom det är billigt kan det avlägsnas genom filtrering i vätskefas-syntes, och det används fortfarande i stor utsträckning. EDC.HCl På grund av dess vattenlöslighet används det ofta i samband med polypeptider och proteiner, och det är också ganska framgångsrikt. En av de största nackdelarna med denna typ av kondensationsreagens är dock att om de används ensamma kommer det att bli fler sidoreaktioner. Forskning visar dock att om de tillsätts under aktiveringsprocessen HOBt, HOAt. Sådana reagens kan kontrollera bireaktioner till ett mycket lågt intervall. Reaktionsmekanismen är som följer:

Figur 2 DIC-aktiveringsreaktionsmekanism

Kondensationsreagenser av oniumsalttyp har hög reaktivitet och snabb hastighet och används nu flitigt, främst inklusive: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP wait. Under användningen av detta reagens måste en organisk bas tillsättas, såsom diisopropyletylamin (DIEA), N- metylmorfolin (NMM). Aminosyran kan aktiveras först efter att detta reagens har tillsatts. Reaktionsmekanismen är som följer:

Hartser som används vid peptidsyntes i fast-fas är i allmänhet polystyren-divinylbensenmaterial, med storlekar från 75 till 150 μm. Graden av tvärbindning- är mellan 1-2 %, och de flesta av de som används nu är 1 %, eftersom det vid denna res}}-graden av DCM är bra{, svällningsegenskaper och har en tredimensionell-nätverksstruktur, och reaktantmolekylerna kan röra sig fritt inuti hartset. Den mest kritiska delen av hartset är anslutningsarmen, som är ansluten till hartset i ena änden och fungerar som ett reaktionsställe i den andra änden. De hartser som för närvarande används allmänt är: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA wait. i PAM, MBHA används i BOC strategi, eftersom det är mycket stabilt mot syra, det måste vara HF, TFMSA Det kan endast skäras under starkt sura förhållanden.

Efter att peptidsyntesen i fast-fas är klar måste ett lämpligt klyvningsreagens väljas för att klyva peptiden från hartset och sedan fälla ut med iseter, samla upp fällningen genom centrifugering och HPLC Separera, rena och frys-torka för att erhålla den slutliga peptidprodukten.

På grund av de olika hartserna och aminosyrasekvenserna som valts är de klyvningsmetoder som väljs under klyvningen inte exakt desamma. I allmänhet väljs klyvningsbetingelserna under sura betingelser. För PAM, MBHA Resin, allmänt använda HF Cutting, måste p-kresol, p-merkaptofenol, anisol och andra reagenser tillsättas under skärningsprocessen. Och för Wang, Rink-Amide, Trt Resin, allmänt använd TFA Cutting, tillsätt etylenglykol, anisolsulfid, vatten, triisopropylsilan, fenol, etc. under skärningsprocessen.

Dessa tillsatsreagenser används huvudsakligen som karbokatjoninfångningsreagenser. Syftet är att fånga upp karbokatjonen som genereras under klyvningsreaktionen och minska de sidoreaktioner som orsakas av attacken av dessa karbokatjoner på vissa aminosyrasidokedjor. De aminosyror som är mer benägna att producera sidoreaktioner inkluderar: Trp, Tyr. Doseringen av skärreagens är i allmänhet 10-15 ml/g harts.

Vanligt använda skärförhållanden: HF/p-kresol/p-tiokresol(90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O(94/1/2,5/2,5), Reaktionen utförs vanligtvis vid rumstemperatur 2 h-4h.

Vid peptidsyntes i fast-fas stöter vi ofta på problemet med peptidsyntesfel eller låg synteseffektivitet. Den främsta orsaken beror på peptidsekvensen, eftersom vissa peptidsekvenser bildas på hartset. -Vikning förändrar hartsets svällningsegenskaper och kan också begrava de aktiva reaktionsställena i hartset, vilket gör det svårt för reaktionen att fortsätta. Aktuella rapporter tyder på det

Använd blandade lösningsmedel, DMSO/DMF, 6N Guanidin/DMF-lösning

Öka reaktionstemperaturen eller använd mikrovågsmetoden

Använd kaotropiska salter, LiCl, NaClO4 vänta.

Använd de med bättre svällningsegenskaper PEG-PS-harts, samtidigt som du minskar hartsbelastningen (0,05-0,2 mmol/g)

​